在流式實驗中，除了配色和對照之外，我們還會經常遇到另一個棘手問題，那便是Fc效應——許多細胞表面表達的Fc受體，能夠識別并結合抗體的Fc端，導致抗體被標記到非目標細胞上，造成了結果的不準確和不真實。
以兔抗為例，兔IgG作為我們最常用的抗體類型之一，其Fc段與人IgG1的Fc段氨基酸序列同源性很高，尤其FcγR結合區(qū)域：
圖1 兔IgG與人IgG1 Fc段氨基酸序列比對
兔IgG很容易與人FcγR產生結合，我們通過親和力測定實驗(BLI法)發(fā)現，野生型兔IgG（Rabbit?IgG-WT）與人Fc受體所有亞型均有強結合，二者間的親和力基本和人IgG與人Fc受體一致：
圖2 野生型兔IgG與人FcγR親和力測定
因此我們在實驗時，通常需要額外增加一個步驟：使用Fc受體封閉試劑來消除Fc效應（Fc?block）。這一操作不僅增加了實驗難度和成本，而且Fc受體封閉試劑的封閉效果也是參差不齊;比如我們最近采購的一個Fc受體封閉試劑，有一定封閉效果，但效果不盡如人意：
圖3 Fc受體封閉試劑效果測試
有沒有可能，找到一個從根源上解決Fc效應的好辦法？
FcZero-rAb?新型骨架流式抗體正式上線！
針對以上研究痛點和難點，Proteintech的研發(fā)團隊基于ABCE?單個B細胞抗體發(fā)現平臺和FcZero?沉默技術平臺開發(fā)了一系列的FcZero-rAb?新型骨架流式抗體，該系列創(chuàng)新產品采用了全新的抗體骨架，從根源上消除了由Fc受體結合引起的非特異性背景信號。
圖4 FcZero-rAb?抗體的Fc沉默原理
相較于傳統(tǒng)骨架流式抗體的先天不足，FcZero-rAb?新型骨架流式抗體突破了行業(yè)壁壘，具有FcZero?沉默技術平臺帶來的多重技術革新優(yōu)勢：①?完全消除Fc效應，②定點定量標記，③僅需一種同型對照，④高穩(wěn)定性。
1.?FcZero-rAb?抗體完全消除Fc效應
FcZero-rAb?新型骨架流式抗體的核心在于FcZero?沉默技術，Proteintech通過該技術在Rabbit IgG的Fc CH2區(qū)域進行關鍵氨基酸位點突變，屏蔽了抗體與Fc受體的結合，形成Fc??silencing(Fc效應沉默)。
該技術完全消除了兔IgG的Fc段與人Fc受體的結合，包括FcγRI (CD64)、FcγRII (CD32)??和FcγRIII (CD16)等多種Fc受體。
圖5 FcZero-rAb?IgG與人FcγR親和力測定
通過FcZero-rAb?新型骨架流式抗體分析人PBMCs樣本，我們可以看到，與傳統(tǒng)流式抗體或者傳統(tǒng)流式抗體+Fc受體封閉劑相比，FcZero-rAb?新型流式抗體背景更干凈，分群更清晰。
圖6 FcZero-rAb?抗體Fc沉默效果對比
2.?FcZero-rAb?抗體定點定量標記
FcZero-rAb?新型骨架流式抗體采用了生物定點標記技術，每一個裸抗分子的Fc段都有兩個明確標記位點，可以定點定量標記所需偶聯物。
與市面上常用的化學隨機標記相比，生物定點標記技術不僅能夠保證偶聯物遠離抗體活性中心，僅在Fc末端而不影響抗體的抗原識別與結合能力，同時還能確保信號強度的均一性和批次間標記情況的重復性 。
圖7 生物定點標記和化學隨機標記效果對比
3.?FcZero-rAb?抗體僅需一種同型對照
傳統(tǒng)流式抗體即使來源于同一個物種，也可能有多個抗體亞型，比如小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgGM(下圖右);而FcZero-rAb?新型骨架流式抗體全系列采用了同一種新型抗體骨架，僅需一種同型對照即可，不僅能夠降低實驗難度，還能有效節(jié)省成本。
圖8 FcZero-rAb?抗體僅需一種同型對照
4.?FcZero-rAb?抗體可長期穩(wěn)定保存
針對FcZero-rAb?新型骨架流式抗體的全新骨架，經SEC-HPLC純度分析、親和力測定和流式實驗檢測，FcZero-rAb?新型骨架流式抗體在4℃保存1年之后，成分依舊單一穩(wěn)定，具有高生物活性。
圖9 FcZero-rAb?抗體熱加速試驗SEC-HPLC純度分析
圖10 FcZero-rAb?抗體熱加速試驗親和力檢測
圖11 FcZero-rAb?抗體熱加速試驗流式檢測
Uni-rAb?重組流式抗體同步上線！
FcZero-rAb?新型骨架流式抗體作為革命性的新型流式抗體，一方面是基于FcZero?沉默技術平臺，另一方面則是依托ABCE?單個B細胞抗體發(fā)現平臺 。
ABCE?單個B細胞抗體發(fā)現平臺是Proteintech最新一代重組兔單克隆抗體開發(fā)平臺，該平臺所開發(fā)的Uni-rAb?重組兔單克隆抗體已于2024年6月上線，其“高質價比”快速贏得了大家的認可和喜愛。
如今，與FcZero-rAb?新型骨架流式抗體同步，Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體也正式亮相，它采用的是野生型Rabbit??IgG抗體骨架，二者間除抗體骨架存在差異之外，其他性質保持一致，均繼承了Uni-rAb?重組兔單克隆抗體高特異性、高親和力及高批次間一致性的優(yōu)良傳統(tǒng)。經充分測試，Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體與經典克隆相比具有相似或更優(yōu)越的性能。
圖12 Uni-rAb?抗體(左)與其他品牌抗體對比(右)
Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體能夠兼容其他傳統(tǒng)流式抗體體系，可作為流式實驗的常規(guī)選擇;FcZero-rAb?新型骨架流式抗體能夠提供更高質量的支持，可完美屏蔽Fc效應干擾，拿到更真實更可靠的實驗成果。二者可滿足不同的實驗場景需求。
作為專業(yè)抗體生產商，Proteintech在創(chuàng)新的道路上從未止步。
從兔多抗、鼠單抗、羊駝納米抗體、重組兔單抗，到如今的FcZero-rAb?新型骨架流式抗體和Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體，Proteintech持續(xù)創(chuàng)新，力爭通過最先進的技術和工藝，給大家提供最優(yōu)質的產品與服務，同時維持合理且更低的價格;讓所有的科研工作者，都能享受到技術創(chuàng)新給大家?guī)淼谋憷椭Α?/strong>
這一次，基于最新平臺和最新技術鍛造的FcZero-rAb?新型骨架流式抗體和Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體，希望能給大家?guī)砣碌捏w驗!
PS：除了產品研發(fā)技術的創(chuàng)新之外，Proteintech官網近期也將上線一個行業(yè)前所未有的創(chuàng)新功能，將通過3D結構展示每一個抗體與抗原的結合位點，并可根據所限定的序列區(qū)域選擇最適配的抗體，敬請期待!
FcZero-rAb?新型骨架流式抗體列表
截止今日，Proteintech已經上線百余個FcZero-rAb?新型骨架流式抗體和千余個Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體，前者目前可提供PE和APC兩種標記，后者可提供9種配色，并且在ABCE?單個B細胞抗體發(fā)現平臺的高通量加持下，每月都能上新大量新產品!
在此小P向各位老師發(fā)出誠摯邀請，歡迎體驗我們創(chuàng)新技術帶來的新一代重組流式抗體!添加微信號：JX1358874227或者關注ProteintechGroup官方公眾號，即可申領試用裝和新品優(yōu)惠。
FcZero-rAb?新型骨架流式抗體列表
（新產品及新配色持續(xù)更新中）
轉自：中國網
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