小芯片讓五種植物病毒快速“現(xiàn)形”

　　在15分鐘內(nèi)可讀全部檢測結(jié)果，相較于傳統(tǒng)檢測一個病毒的十幾個小時，大大縮短了檢測時間，提高了檢測效率。

　　2010年12月21日，在北京檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的國家質(zhì)檢總局科技計劃項目《植物病毒蛋白芯片檢測技術(shù)研究》專家驗(yàn)收會上，項目組研發(fā)的可同時檢測香石竹斑駁病毒、黃瓜綠斑駁病毒、煙草脆裂病毒、百合無癥病毒和番茄斑萎病毒五種檢疫性植物病毒的五聯(lián)卡硝酸纖維素膜單抗檢測蛋白芯片，在15分鐘內(nèi)即可讀全部檢測結(jié)果，相較于傳統(tǒng)檢測一個病毒的十幾個小時，大大縮短了檢測時間，提高了檢測效率。此科研成果引起了專家高度重視。

　　資料顯示，植物感染病毒后，對植物細(xì)胞的影響與動物病毒一樣，會打亂植物細(xì)胞的正常代謝活動，使植物的生長和發(fā)育遭到破壞，從而降低農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。番茄斑萎病毒、煙草脆裂病毒、黃瓜綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒、百合無癥病毒都能造成蔬菜、花卉等重要經(jīng)濟(jì)作物的損失，其中番茄斑萎病毒、黃瓜綠斑駁病毒是重要外來檢疫對象，其余3種病毒由于其危害重大，在國內(nèi)和各省區(qū)之間也列為重要防疫對象。據(jù)統(tǒng)計，每年由于病毒病的危害，全世界的糧食損失達(dá)200億美元。病毒通常造成退綠、矮化、畸形等癥狀。由于病毒是專性寄生物，至今仍缺乏具有選擇性的高效治療藥劑，使病毒病日益嚴(yán)重，成為當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的一類重要病害。所以，在口岸檢測中起阻斷、隔離的植物檢疫就是最好的防治手段。

　　北京檢驗(yàn)檢疫局《植物病毒蛋白芯片檢測技術(shù)研究》項目組研究制備了上述5種病毒的單克隆抗體細(xì)胞株的單克隆抗體和多克隆抗體，并擁有了自主知識產(chǎn)權(quán)。該項目組負(fù)責(zé)人北京檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心副主任汪萬春介紹，為方便使用，項目組同時研發(fā)了五聯(lián)卡硝酸纖維素膜單抗檢測蛋白芯片。相較于同類研究采用玻璃等基質(zhì)制備芯片，硝酸纖維素膜基質(zhì)的使用降低了制備工藝難度和應(yīng)用對設(shè)備的依賴性；用硝酸纖維素膜為材料的蛋白芯片的基質(zhì)；用金顆粒標(biāo)記抗體；玻璃纖維素膜制備金標(biāo)墊；檢測靈敏多克隆抗體作為標(biāo)記抗體，單克隆抗體作為檢測抗體組裝芯片，相較于只用多克隆抗體作為檢測抗體，顯著地提高了檢測特異性；五種病毒同時檢測，檢測結(jié)果15分鐘內(nèi)可讀，相較于傳統(tǒng)檢測一個病毒的十幾個小時，縮短了檢測時間，大大提高了檢測效率。

　　驗(yàn)收會上，專家們審查了項目組提交的相關(guān)資料，聽取了項目組的工作報告和技術(shù)報告，并進(jìn)行了質(zhì)詢。參會專家對項目組的研究工作給予了充分的肯定。專家們一致認(rèn)為：該項目試驗(yàn)設(shè)計合理，方法科學(xué)，數(shù)據(jù)翔實(shí)，資料齊全，結(jié)果可靠，完成了計劃任務(wù)書規(guī)定的研究內(nèi)容，達(dá)到國際先進(jìn)水平，一致同意項目通過鑒定，并建議盡快推廣應(yīng)用。

　　汪萬春還介紹說，該項目組根據(jù)研究成果申請了兩項國家發(fā)明專利；在《INDIANJOURNALOFVIROLOGY》發(fā)表SCI研究論文1篇；制定了《番茄斑萎病毒、煙草脆裂病毒、黃瓜綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒、百合無癥病毒快速篩選檢測蛋白芯片法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)1項，目前正在系統(tǒng)內(nèi)征求意見。

　　目前，檢測植物病毒的方法主要采用進(jìn)口抗血清檢測試劑盒進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）以及用電鏡直接觀察組織中的病毒粒子。從已有報道看，目前國內(nèi)外對血清學(xué)檢測方法均基于多抗血清而建立的，商品ELISA檢測試劑盒也多是多抗血清，然而多克隆抗體存在非特異性高、準(zhǔn)確性和均質(zhì)性差、產(chǎn)量有限等不足，難以滿足日益增長檢測需求；電鏡檢測需要昂貴的設(shè)備而不能普及應(yīng)用。因而迫切需要建立快速、準(zhǔn)確、簡便的檢測方法，為病毒病的診斷提供技術(shù)支持。為此，本項目利用五種病毒的抗原免疫小鼠和大白兔，制備了五種病毒的單、多克隆抗體，開展了檢測五種病毒的技術(shù)研究，開發(fā)了蛋白芯片，為五種病毒的田間檢測及進(jìn)出口檢疫提供技術(shù)支撐和快速的檢測方法和產(chǎn)品。

來源：中國國門時報

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